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真空轉印儀使用該如何操作
點擊次數:934 發布時間:2021-03-10
  真空轉印儀使用需要剪一塊尼龍膜,要求其大小比窗口密封墊的邊緣至少寬0.5cm。再剪一張與尼龍膜大小一致的濾紙。剪一塊窗口密封墊,要求密封墊的邊緣比膠的邊緣至少窄0.5cm。
 
  真空轉印儀操作步驟:
 
  1.把尼龍膜以45度角方向浸入水中,潤濕膜,然后在在合適的轉印溶液中浸潤膜。
 
  2.把孔狀真空板置于平臺上。依次放置潤濕的濾紙,尼龍膜,用10ml的玻璃管趕走膜上的氣泡。
 
  3.用水潤濕密封O型環。
 
  4.把窗口密封墊置于膜上。確保密封墊覆蓋住整個O型環。同時確保密封墊覆蓋住濾紙/膜。請參照下圖進行組裝。
 
  5.把膠輕柔的置于密封墊上,覆蓋住窗口。用玻璃管趕走氣泡,確保膠的邊緣超出密封墊至少5cm。
 
  6.把密封框置于頂部,鎖住密封框。
 
  7.旋松(逆時針)真空調節閥幾圈以防止強的內部真空。
 
  8.慢慢的旋緊調節閥直到讀數為5inchesHg。如果使用Bio-Rad的真空泵,需要在轉印前預熱10分鐘。如果不預熱,真空泵升壓會比較慢,約在10分鐘后穩定。
 
  9.沿著窗口的邊緣用手指輕輕的按住膠。此操作可幫助在膠和密封墊之間形成緊密的真空密封。
 
  10.輕輕的倒入1000至1500ml的轉印緩沖液。檢查膠是否移位。如果膠漂浮起來了,需要拆掉密封框,排干轉膜液,重新按5至10步驟進行操作。
 
  11.把轉印儀的蓋子蓋好。檢查緩沖液的水平面,其高度應該高于膠。檢查真空壓力,調節至5inchesHg。
 
  12.在設定壓力下轉膜90分鐘。
 
  轉印后這樣操作:
 
  1.90分鐘后,關掉真空裝置。
 
  2.打開密封框,把上層緩沖液排出。
 
  3.拿掉轉印膠,位于窗口中的膠應該比位于窗口外的膠薄一半。檢查膠中剩余的DNA,可以用EB染色來觀察。
 
  4.拿掉窗口密封墊和尼龍膜。把膜浸泡在2×SSC中5分鐘,然后把膜夾在兩層濾紙中在真空干燥箱中80度干燥30分鐘。干燥后的膜即可進行雜交。
 
  5.拿掉轉印儀上的濾紙并從底盤中倒掉緩沖液,按要求清洗轉印儀。
 
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